Rosetta 2(DE3)是BL21的衍生菌株。将具有氯霉素抗性的pRARE2质粒导入BL21(DE3)细胞中即是Rosetta 2(DE3)。pRARE2质粒可补充大肠杆菌缺乏的7种稀有密码子(AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, GGA和CGG)对应的tRNA，提高外源基因的表达水平。Rosetta 2(DE3)基因组整合了λ噬菌体DE3区(DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶)，因而可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶，可用于pET系列、pGEX、pMAL等系统，在IPTG诱导下表达重组蛋白。Rosetta 2(DE3)也是lon蛋白酶和膜外蛋白酶ompT的缺陷型菌株，这两种酶的缺失有效防止异源蛋白在大肠杆菌体内的降解。Rosetta 2(DE3)感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率达108 cfu/μg DNA。