SpCas9来源于S. pyogenes菌株，是依赖于crRNA和tracrRNA(或连接后形成的sgRNA)引导的DNA内切核酸酶，在靶标双链DNA存在PAM(NGG)的情况下，特异地切割靶标双链DNA，使DNA双链断裂并生成平末端。PAM对于SpCas9的识别和切割都是必需的，其切割位点位于目标序列(target sequence)内，离PAM区3个碱基。SpCas9酶的HNH和RuvC结构域分别负责切割靶标双链DNA中与sgRNA配对和非配对的链。本产品中，SpCas9的D10被突变为A，从而使其RuvC结构域失活。因此，SpCas9 D10A Nickase只有HNH结构域有剪切活性，仅剪切靶标dsDNA中的TS链，形成单链缺刻。